產品更新-FITC標記鬼筆環肽(綠光)

產品簡介

鬼筆環(huan)肽(tai)（Phalloidin），又稱鬼筆鵝膏素(su)，最初是(shi)從毒蘑菇鬼筆鵝膏菌(Amanita phalloides)中分離到的(de)(de)(de)一(yi)種雙環(huan)肽(tai)，可(ke)(ke)以(yi)極-高的(de)(de)(de)親(qin)和(he)力和(he)特異性與(yu)肌動蛋(dan)白(bai)絲F-actin結(jie)(jie)(jie)合，不(bu)會(hui)結(jie)(jie)(jie)合單(dan)體(ti)肌動蛋(dan)白(bai)（G-actin）。鬼筆環(huan)肽(tai)對大小纖維(wei)的(de)(de)(de)親(qin)和(he)力相近，在許多不(bu)同(tong)的(de)(de)(de)動植物物種的(de)(de)(de)肌肉(rou)和(he)非(fei)肌肉(rou)細胞中，基本(ben)都按(an)照一(yi)個(ge)肌動蛋(dan)白(bai)亞基與(yu)一(yi)個(ge)鬼筆環(huan)肽(tai)分子的(de)(de)(de)化學計量比結(jie)(jie)(jie)合。不(bu)像肌動蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)，對不(bu)同(tong)物種或來(lai)源(yuan)的(de)(de)(de)機動蛋(dan)白(bai)親(qin)和(he)力會(hui)發(fa)生明顯變化。鬼筆環(huan)肽(tai)的(de)(de)(de)非(fei)特異性結(jie)(jie)(jie)合幾乎(hu)可(ke)(ke)以(yi)忽略，染(ran)(ran)色(se)和(he)未染(ran)(ran)色(se)區域的(de)(de)(de)差異非(fei)常明顯。鬼筆環(huan)肽(tai)及其衍生物在納摩爾濃度(du)即(ji)可(ke)(ke)對F-actin染(ran)(ran)色(se)，可(ke)(ke)以(yi)非(fei)常方(fang)便的(de)(de)(de)標記、識別和(he)定量研究(jiu)F-actin的(de)(de)(de)分布(bu)。

本產品為(wei)熒光染(ran)(ran)料(liao)FITC標記的鬼筆(bi)環(huan)肽，以20 μM儲存液形式提供，溶(rong)劑為(wei)甲醇。常(chang)用濃度范圍80-200 nM，按照(zhao)每次染(ran)(ran)色使用200 μL工(gong)作(zuo)液，100 nM工(gong)作(zuo)濃度計算，本產品可進行100次細胞染(ran)(ran)色。

操作步驟

1. 培(pei)養好的細胞(bao)(bao)爬片(pian)（密度至少達到半(ban)匯合），去除(chu)培(pei)養液，用37℃預熱的1×PBS緩(huan)沖(chong)液清(qing)洗細胞(bao)(bao)清(qing)洗細胞(bao)(bao)2次。

2. 加(jia)入含(han)(han)4%甲(jia)(jia)醛的固定(ding)(ding)液覆蓋細胞，室溫固定(ding)(ding)10 min。注意，甲(jia)(jia)醇(chun)能破壞肌動蛋白(bai)，因(yin)此固定(ding)(ding)液中不得含(han)(han)有甲(jia)(jia)醇(chun)，避免(mian)使用(yong)含(han)(han)甲(jia)(jia)醇(chun)的甲(jia)(jia)醛溶液。

3. 用1×PBS緩沖液清洗細(xi)胞2-3次，每次30 s-1 min。

4. 用破膜液覆蓋細胞，室溫透化細胞5-10 min。

5. 用1×PBS緩(huan)沖液清洗細胞(bao)2-3次，每(mei)次30 s-1 min。

6. 細(xi)胞(bao)爬(pa)片(pian)稍微甩干后，用(yong)組化筆畫(hua)圈使細(xi)胞(bao)位于圈中央。取200 μL現配的FITC標(biao)記(ji)鬼筆環肽(tai)染色(se)(se)工作(zuo)液完-全覆蓋(gai)細(xi)胞(bao)，室溫避光孵育(yu)30 min。注意，通常情況下，4-37℃均適合(he)染色(se)(se)。為避免染色(se)(se)工作(zuo)液揮發導致干片(pian)，孵育(yu)過程需將細(xi)胞(bao)爬(pa)片(pian)置于密封容器內，例如避光濕(shi)盒。

7. 用1×PBS緩沖液清洗細胞(bao)2-3次，每次30 s-1 min。

8. （可選做(zuo)）向爬片上滴加即用(yong)型DAPI染色(se)液(ye)覆蓋細胞(bao)，進行細胞(bao)核(he)染色(se)3-5 min。用(yong)1×PBS緩沖(chong)液(ye)清洗細胞(bao)2-3次，每次30 s-1 min

9. 細胞爬片(pian)稍甩(shuai)干后，倒置在滴加一滴抗熒光淬滅封(feng)(feng)片(pian)劑的(de)載(zai)玻片(pian)上(shang)，用(yong)紙巾(jin)吸掉(diao)對于封(feng)(feng)片(pian)劑。

【可選步(bu)驟(zou)】：完(wan)成步(bu)驟(zou)7后，直接將蓋(gai)玻片(pian)倒(dao)置(zhi)在滴加(jia)含DAPI的抗熒光(guang)淬滅封片(pian)劑（推薦(jian)G1407）的載玻片(pian)上，然后吸掉多余的封片(pian)劑。以熒光(guang)顯(xian)微鏡(jing)或激光(guang)共聚焦顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察結果。

10. 熒光顯(xian)微(wei)鏡或激(ji)光共聚焦顯(xian)微(wei)鏡觀察結果(guo)，選擇FITC（Ex/Em=492/518 nm）和DAPI（Ex/Em=364/454 nm）通(tong)道。

注意事項

1. 熒光(guang)染(ran)料都存在淬滅的問題，建議染(ran)色后盡快(kuai)完成檢測(ce)及觀察(cha)拍照(zhao)。

2. 甲醇可(ke)以破壞actin蛋白，因此樣本前期固定不能(neng)使用含有甲醇的固定液。

3. 鬼(gui)筆環肽通常不具有細(xi)胞(bao)通透性，極少(shao)用于活細(xi)胞(bao)染色。

4. 本(ben)產品溶劑為甲(jia)醇，極(ji)易揮(hui)發(fa)，每次用完以后需及時擰緊管蓋密(mi)封(feng)保存。

5. 操作時(shi)請穿實驗服，并佩戴一次性(xing)手(shou)套。