產品更新-小鼠成纖維細胞

培養基 EMEM完-全培養基：90%EMEM+10%FBS

傳代方法(fa) 復蘇步(bu)驟(zou)：①凍(dong)存管從液氮(dan)或-80℃冰箱中取出(chu)放(fang)入PE手套中，迅速沒入37℃水浴鍋(guo)，搖晃凍(dong)存管加(jia)速溶解(jie)，以(yi)1min內全部溶解(jie)為宜；②在超凈臺中將(jiang)溶解(jie)好的(de)細胞(bao)液加(jia)入到裝有(you)9mL完-全培(pei)養基的(de)離心(xin)管內，1000-1200rpm離心(xin)5min，棄去上清(qing)液，用(yong)1-2mL完-全培(pei)養基重懸細胞(bao)。③將(jiang)細胞(bao)懸液加(jia)入到含有(you)5-6mL完-全培(pei)養基的(de)T25瓶中，放(fang)入培(pei)養箱培(pei)養。

細(xi)(xi)(xi)(xi)胞傳代：①將舊培養(yang)液(ye)吸(xi)除(chu)，PBS清洗兩遍后，加(jia)入(ru)1-2mL胰酶(mei)（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；②鏡下觀察消化情況，在細(xi)(xi)(xi)(xi)胞邊緣縮小，貼壁松動(dong)時（可用吸(xi)管(guan)吸(xi)起(qi)些許胰酶(mei)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)某處(chu)，肉(rou)眼(yan)可見細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)脫落，即消化完成(cheng)，否(fou)則繼續消化），直接(jie)吸(xi)掉胰酶(mei)，加(jia)入(ru)5-6mL完-全培養(yang)基，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)，把細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)吹(chui)落，吹(chui)散。③將細(xi)(xi)(xi)(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的T25瓶中，添(tian)加(jia)適當的完-全培養(yang)基，把細(xi)(xi)(xi)(xi)胞懸(xuan)液(ye)打(da)勻，于培養(yang)箱中培養(yang)。；④注意培養(yang)基pH值變(bian)化和細(xi)(xi)(xi)(xi)胞密度，定期換液(ye)（每周(zhou)2-3次），待細(xi)(xi)(xi)(xi)胞密度達(da)到80%-90%時，重復傳代操作或者凍存(cun)。

生長條件 37℃；5%CO2+95%空氣；
生長特性 貼壁生長
存儲條件 液氮
安全等級 1
形態 成纖維細胞樣，多角形，圓形，邊緣不規則，單層貼壁生長，背景干凈，不產色素，無空泡
應(ying)用(yong)領域 1948年三月建立(li)了(le)NCTC clone 929(小(xiao)(xiao)鼠(shu)結締組織(zhi))，細(xi)(xi)胞系(xi)L的(de)克(ke)隆。細(xi)(xi)胞系(xi)L是最(zui)早建立(li)的(de)連續培養細(xi)(xi)胞系(xi)之一(yi)，而clone 929是最(zui)早的(de)克(ke)隆株。 從一(yi)只100日齡的(de)雄(xiong)性C3H/An小(xiao)(xiao)鼠(shu)的(de)正常皮下疏松(song)結締組織(zhi)入脂肪組織(zhi)中建立(li)了(le)親(qin)本細(xi)(xi)胞系(xi)L。 第95代的(de)細(xi)(xi)胞系(xi)L使(shi)用(yong)毛(mao)細(xi)(xi)管法分離單細(xi)(xi)胞建立(li)了(le)clone929。 檢測發現鼠(shu)痘病毒陰性。